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膜再生液（抗体去除液、抗体剥离液）

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描述：
膜再生液，也称做抗体剥离液体、一抗二抗去除液。允许对同一张膜进行多次 Western
Blot 检测。在室温条件下，将用过的膜浸泡在膜再生液中30 分钟，能够选择性清除与膜
抗原结合的第一抗体及第二抗体，但不影响电转移到膜上的蛋白。随后可以使用不同的抗
体进行下一轮 Western Blot 实验，可利用同一张膜进行多次蛋白检测。不仅适宜用少量样
品多次检测多种不同蛋白，即使样品量并不匮乏，采用这种多次检测同一张膜上的蛋白的
策略，能省去给药处理、蛋白电泳和膜转移等耗费性步骤。
特点： （1）无毒无味无害，室温保存和使用；
           （2）可对同一张膜进行 10 次以上的Western Blot 检测。
适用： 硝酸纤维素膜或PVDF 膜。使用前膜可以保存在PBS 或TBS 缓冲液，也可以室温干
燥保存数月。干的PVDF 膜应该先用甲醇泡 5 分钟。
安全性：无毒无味。按照普通化学品安全规范进行操作和处置。
储存： 室温保存，一年有效。温度过低可能出现浑浊。
操作步骤：
1. 将膜充分浸泡于适当体积的再生液中，室温孵育 15~30 分钟并不时晃动。孵育时
间的长短应参考后面的说明进行优化。洗脱某些抗体需要较长的时间如 30~60 分钟。
2. 用镊子取出膜，用自备Western Blot 洗涤缓冲液或封闭洗涤缓冲液淋洗膜一次，再洗膜
5 分钟。
3. 此时膜上抗体已去除，膜已再生。用脱脂奶粉或BSA 封闭，进行下一轮Western Blot
实验。
说明:
1. 膜再生或Stripping 的实质是在不影响膜上结合的抗原的条件下，将与抗原分子结合的
一抗和二抗洗脱下来。有许多因素影响抗体从膜上的洗脱，如膜的类型、抗体类型和浓
度及其与抗原结合特性等。按下面的说明优化再生液中孵育膜的时间至关重要。
2. 确定膜上抗体是否去除与优化再生液中孵育膜的时间：用ECL 工作液孵育再生后的膜
约 1 分钟，然后进行X 光 胶片曝光并显影，可确定膜上的抗体是否完全去除。如显
示条带，表明抗体未完全去除，应继续将膜浸泡在再生液中孵育30~60 分钟。然后再次
ECL 检查膜上抗体是否去除。重复此步骤直到抗体完全去除并确定最佳孵育时间。
3. 由于至今尚不清楚的原因，使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用BSA 封闭的膜上的抗体更
容易被 Strip 下来。因此准 备进行Strip 的膜，应该使用脱脂奶粉而不是BSA 封闭。
4. 尽量避免使用干燥保存的膜，因为干的膜上的抗体很难被Strip 干净。

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